Es gibt verschiedene Möglichkeiten, die Anwesenheit von Mykoplasmen in einer kontaminierten Zellkultur nachzuweisen. Eine häufig verwendete aber unzuverlässige Methode ist die DAPI Färbung der Zellen mit anschließender mikroskopischer Analyse. Die sichersten Ergebnisse für die Routineuntersuchung liefern jedoch PCR-basierte Methoden. Biontex bietet mit MycoSPY® , MycoSPY® Master Mix und MycoSPY® qPCR Master Mix schnelle, zuverlässige und äußerst sensitive Kits für den PCR-basierten Mykoplasmennachweis in der Zellkultur an.
Der MycoSPY® qPCR Master Mix enthält alle notwendigen Bestandteile für die PCR Analyse (hot-start Taq Polymerase, Puffer, dNTPs, Primer, FAM/HEX Fluoreszenzsonden). Im Kit enthalten sind eine Interne Kontrolle sowie PCR geeignetes Wasser zum Rehydratisieren des lyophilisierten Master Mixes. Mit einem für die Detektion von FAM- und HEX-Fluoreszenzfarbstoffen geeigneten Realtime-PCR Thermocycler ist ein einfacher und schneller Nachweis von Mykoplasmen in der Zellkultur möglich.
Wenn eine Kontamination mit Mykoplasmen in Ihrer Zellkultur nachgewiesen wurde, entfernt die hocheffektive Antibiotika-Mischung MycoRAZOR® Mykoplasmen schnell und effizient.
Arbeitsablauf
Der Master Mix mit integrierten FAM/HEX Fluoreszenzsonden und Interner Kontrolle erlaubt das denkbar einfachste Pipettierschema und die anschließende Detektion in Real Time:
Mehr als ein Viertel aller tierischen Zellkulturen sind mit Mykoplasmen / Mollicutes kontaminiert. Die am häufigsten in Zellkulturen gefundenen Stämme mit einer Wahrscheinlichkeit von insgesamt 94% sind: M. fermentans (47%), M. hyorhinis (19%), M. orale (10%), M. arginini (9%), A. laidlawii (6%) und M. hominis (3%). Darüber hinaus wurden folgende Stämme mit geringerer Wahrscheinlichkeit gefunden: M. gallisepticum, M. pneumoniae, M. salivarium, M. synoviae und S. citri. Alle diese Mollicute-Stämme werden neben einer Vielzahl anderer durch den MycoSPY® qPCR Master Mix nachgewiesen. Die Verifikation der Primerspezifität wurde per BLAST Analyse durchgeführt. Die folgende Liste zeigt nur Mollicute-Stämme mit 100% Sonden- und Primer-Match bezüglich des für Mollicute-Stämme charakteristischen 16S ribosomalen DNA Genes.
Liste der durch MycoSPY® qPCR Master Mix detektierbaren Mollicute-Stämme
| Mycoplasma |
| M. agalactiae |
M. crocodyli |
M. lagogenitalium |
M. pulmonis |
| M. alligatoris |
M. cynos |
M. microti |
M. salivarium |
| M. alvi |
M. dispar |
M. moatsii |
M. sualvi |
| M. amphoriforme |
M. edwardii |
M. molare |
M. synoviae |
| M. arginini |
M. felis |
M. mucosicanis |
M. testudineum |
| M. bovigenitalium |
M. fermentans |
M. muris |
M. testudinis |
| M. bovis |
M. gallisepticum |
M. mustelae |
M. verecundum |
| M. buccale |
M. genitalium |
M. mycoides |
M. volis |
| M. canadense |
M. hominis |
M. orale |
M. yeatsii |
| M. canis |
M. hyopneumoniae |
M. oxoniensis |
M. zalophidermidis |
| M. capricolum |
M. hyorhinis |
M. penetrans |
|
| M. citelli |
M. hyosynoviae |
M. phocidae |
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| M. columborale |
M. imitans |
M. phocicerebrale |
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| M. conjunctivae |
M. iowae |
M. pirum |
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| M. cricetuli |
M. lacerti |
M. pneumoniae |
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| Ureaplasma |
| U. canigenitalium | U. diversum | U. gallorale | U. parvum |
| U. urealyticum | | | |
| Mesoplasma |
| M. chauliocola | M. florum | M. photuris | M. tabanidae |
| M. entomophilum | M. grammopterae | M. syrphidae | |
| Spiroplasma |
| S. cantharicola | S. lineolae | S. taiwanense | S. citri |
| S. platyhelix | | | |
| Acholeplasma |
| A. laidlawii | | | |
Testsamples auf Anfrage gegen Feedback:
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